ارتباط مستقیم با کارشناس فروش
استخراج DNA/RNA در روش ستونی
استخراج به روش ستونی یک تکنیک استاندارد در زیست‌شناسی مولکولی است که برای جداسازی و خالص‌سازی اسیدهای نوکلئیک (DNA و RNA) از نمونه‌های بیولوژیکی استفاده می‌شود.
در این روش، نمونه‌های سلولی با استفاده از بافرهای خاص و آنزیم‌هایی مانند پروتئیناز K تخریب می‌شوند تا اسیدهای نوکلئیک آزاد شوند. سپس، این مخلوط به ستون‌هایی حاوی غشای سیلیکایی منتقل می‌شود.
در شرایط خاص با استفاده از محلول‌های بافر حاوی نمک، اسیدهای نوکلئیک به غشا متصل می‌شوند و ناخالصی‌ها از ستون عبور می‌کنند.
در نهایت، با تغییر شرایط بافری، اسیدهای نوکلئیک خالص از غشا جدا شده و جمع‌آوری می‌شوند.
این روش به دلیل سادگی، سرعت و خلوص بالای محصول، در بسیاری از آزمایشگاه‌ها و تحقیقات زیستی مورد استفاده قرار میگیرد
استخراج DNA/RNA مبتنی بر ستون یک روش استخراج فاز جامد برای تمیز کردن سریع اسیدهای نوکلئیک است . این روش به این واقعیت متکی است که اسید نوکلئیک تحت شرایط خاصی به فاز جامد سیلیس متصل می شود.
مراحل استخراج DNA/RNA به روش ستونی
1. لیز سلولی (Cell Lysis)
در این مرحله، سلول‌های نمونه با استفاده از بافرهای لیز و آنزیم‌هایی مانند پروتئیناز K شکسته می‌شوند تا محتویات داخلی آن‌ها از جمله DNA یا RNA آزاد شود. این فرآیند معمولاً در دمای ۵۶ درجه سانتی‌گراد انجام می‌شود تا تمام اجزای سلولی تجزیه شوند.
2. اتصال اسید نوکلئیک به غشای سیلیکا (Binding)
مخلوط لیز شده به ستون حاوی غشای سیلیکایی منتقل می‌شود. در حضور محلول‌هایی با غلظت بالای نمک، اسیدهای نوکلئیک به غشا متصل شده و سایر مواد مانند پروتئین‌ها و RNA از ستون عبور می‌کنند.
3. شستشو (Washing)
برای حذف کامل ناخالصی‌ها، ستون با استفاده از بافرهای شستشو چندین بار شسته می‌شود. این بافرها نمک‌ها، دترجنت‌ها و سایر مواد ناخواسته را از ستون جدا می‌کنند.
4. الوشن (Elution)
در مرحله نهایی، اسید نوکلئیک خالص از غشا جدا می‌شود. این کار با اضافه کردن بافری با غلظت نمک پایین یا آب انجام می‌شود. در نهایت، اسید نوکلئیک در یک میکروتیوب جمع‌آوری شده و برای استفاده در آزمایش‌های بعدی آماده است.
مزایای روش استخراج ستونی
سرعت و کارایی بالا: این روش به دلیل سادگی و سرعت بالا، در بسیاری از آزمایشگاه‌ها مورد استفاده قرار میگیرد.
خلوص بالا: اسید نوکلئیک استخراج‌شده با این روش دارای خلوص بالایی است که برای کاربردهای حساس مانند PCR و توالی‌یابی مناسب است.
ایمنی: در این روش نیازی به استفاده از حلال‌های آلی مانند فنل و کلروفرم نیست که ایمنی کار را افزایش می‌دهد.
سهولت در استفاده: استفاده از کیت‌های استخراج ستونی بسیار ساده است و نیاز به تخصص خاصی ندارد.
کاربردهای استخراج DNA/RNA با روش ستونی
تحقیقات زیست‌شناسی مولکولی: شناسایی جهش‌های ژنی، مطالعات برهم‌کنش DNA-پروتئین.
تشخیص بیماری‌ها: بررسی بیماری‌های ژنتیکی و عفونی با PCR یا توالی‌یابی.
مهندسی ژنتیک: کلونینگ ژن، تولید تراریخته‌ها و تغییر ژنتیکی.
پزشکی قانونی: استخراج از نمونه‌های بسیار کوچک مانند خون یا مو.
زیست‌محیطی: بررسی DNA موجود در خاک، آب و نمونه‌های گیاهی یا جانوری.
به اختصار استخراج DNA/RNA به روش ستونی منوط به حذف پروتئین‌های سلولی و هیستونی متصل به DNA میباشد که به سه روش زیر انجام میگیرد:
- با اضافه کردن پروتئاز
- از طریق رسوب دهی پروتئین‌ها با سدیم یا آمونیوم سولفات
- یا خارج سازی آن‌ها از طریق یک ترکیب فنل- کلروفرم که این کار باید قبل از رسوب دادن دی‌ان‌ای انجام گیرد.
پس از استخراج، دی‌ان‌ای را به آرامی در یک بافر قلیایی (معمولاً در بافر TE )یا در آب خالص حل می‌کنند.
کیت‌های استخراج به روش ستونی، به‌ویژه کیت‌های ارائه‌شده توسط شرکت یکتا تجهیز آزما، یکی از گزینه‌های معتبر و کارآمد در این حوزه هستند. این کیت‌ها با بهره‌گیری از تکنولوژی ستون‌های سیلیکایی، امکان استخراج DNA/RNA با خلوص بالا را از انواع نمونه‌های بیولوژیکی مانند بافت‌های حیوانی، سلول‌ها، باکتری‌ها و خون فراهم می‌کنند. استفاده از این کیت‌ها به‌ویژه در تکنیک‌های حساس مانند Real-Time PCR، RNA Sequencing و Microarray توصیه می‌شود. همچنین، این کیت‌ها با ارائه دستورالعمل‌های دقیق و مواد با کیفیت، فرآیند استخراج را ساده و سریع می‌کنند.
برای اطلاعات بیشتر و خرید این کیت‌ها، می‌توانید به فروشگاه وب‌سایت یکتا تجهیز آزما مراجعه کنید.
نتیجه‌گیری
روش استخراج DNA/RNA به روش ستونی، به دلیل سرعت بالا، سادگی اجرا و کیفیت مطلوب اسیدهای نوکلئیک استخراج‌شده، به‌عنوان یک استاندارد معتبر در آزمایشگاه‌های مولکولی شناخته می‌شود. با استفاده از کیت‌های مناسب و رعایت دقیق مراحل پروتکل، می‌توان به نتایج قابل‌اعتماد و با کیفیت دست یافت
