محلول RNAlater :
محلولlater RNA برای ذخیره سازی بافت تازه طراحی شده است به گونه ای که حفظ RNA با کیفیت بالا را پس از جداسازی تضمین می کند. این امر به ویژه در محیط‌های کلینیکی که ایمنی و رفاه بیمار دغدغه اصلی است و روش‌های جمع‌آوری بافت باید سریع، ساده و ایمن باشد، اهمیت دارد. همچنین، روش‌های ساده و کارآمد برای جمع‌آوری بافت میتواند در مشارکت‌کنندگان در پروژه های بالینی انگیزه همکاری ایجاد نماید.
محلول RNAlater با نفوذ در بافت ، عمل تثبیت و محافظت از RNA در نمونه های تازه را انجام میدهد. با استفاده از محلول RNAlater نیاز به نگهداری و یا حمل به طریقه انجماد کاملا مرتفع میشود.
با نگهداری نمونه در محلول RNAlater ، کاربر قادر است نمونه را برای مدت طولانی بطوریکه که RNA آن کاملا حفظ شود ، نگهداری میکند و کاربر میتواند عمل بررسی و آزمایش نمونه را به زمان دلخواه به تعویق اندازد. همچنین برای نگهداری نمونه با حفظ RNA آن ، میبایست کاربر نمونه را در محلول RNAlater در دمای 20- درجه سانتی گراد نگهداری کند.
آیا RNA later سمی است؟
پاسخ این سوال خیر است.در واقع RNAlater – یک محلول غیر سمی است که برای تثبیت محتوای RNA نمونه‌ها از جمله بافت استفاده میشود.
شرایط نگهداری از محلول RNAlater
- محلول RNAlater را در دمای اتاق نگهداری کنید.
- در صورت مشاهده بلورها و یا ناخالصی ها ، آن را در دمای 37 درجه سانتی گراد گرم کنید تا بلورها حل شده و محلول یکدست شود.
- در صورتیکه بلورها در دمای 37 درجه سانتی گراد حل نشدند ، محلول RNAlater را به مدت 30 دقیقه در دمای 65 درجه سانتی گراد گرم کنید و مرتبا محلول را با تکان دادن بطری مخلوط کنید. وقتی محلول RNAlater شفاف و یکدست شد ، آن را به قسمت های مورد نیاز خود تقسیم کنید. حرارت دادن محلول RNAlaterبه روش گفته شده به هیچ عنوان در عملکرد آن تاثیری نخواهد گذاشت.
سازگاری محلول RNAlater با انواع نمونه ها :
محلول RNAlater با انواع نمونه ها برای نگهداری و حفظ RNA سازگاری کامل دارد. کاربر میتواند از این محلول برای نمونه هایی مثل بافت ، سلول های کشت داده شده ، با کتری ها و مخمر استفاده کند.
توجه داشته باشید این محلول برای بافت هایی که نفوذ به داخل آن ضعیف تر انجام میشود مانند استخوان و یا بافت گیاهی سخت ، مناسب و سازگار نیست.
سازگاری محلول RNAlater به طور گسترده ای با بافت های حیوانی مانند مغز ، قلب ، کلیه ، طحال ، کبد ، چربی ، ریه و همچنین برای گلبول های سفید خون و برخی بافت های گیاهی مورد آزمایش قرار گرفته است و به اثبات رسیده است.
همچنین پروتئین نیز در محلول RNAlater حفظ میشود ولی از آنجا که محلول RNAlaterپروتئین را دناتوره میکند ، بنابریان پروتئین نمونه هایی که در محلول RNAlater نگهداری میشوند برای پروسه western blotting و یا Gel electrophoresis مناسب هستند.
راهنمای استفاده از محلول RNAlater
- از محلول RNAlater فقط برای بافت های تازه استفاده کنید. به هیچ عنوان بافتی که قبلا به دمای انجماد رسیده است را برای نگهداری در محلول RNAlater قرار ندهید.
- نمونه های بزرگ را به قطعات 0.5 سانتی متری برش بزنید و سپس در محلول RNAlater غوطه ور کنید.
- بیشتر نمونه ها را می توان در محلول RNAlater به مدت یک هفته در دمای اتاق نگهداری کرد و یا برای نگهداری به مدت نامحدود میتوانید در دمای 20- و یا 80- سانتی گراد نگهداری کنید.
- نمونه ها را در محلول RNAlater بلافاصله فریز نکنید. ابتدا یک شب در دمای 4 درجه سانتی گراد نمونه را در محلول بصورت غوطه ور نگهداری کنید و اجازه دهید محلول RNAlater به طور کامل به داخل بافت نفوذ کند و سپس برای نگهداری نامحدود به دمای 20- و یا 80- منتقل کنید.
به طور کل مزایای استفاده از RNA later به قرار زیر است :
- نفوذ سریع به بافت به منظور تثبیت و محافظت از RNA سلولی
- RNase به سرعت غیرفعال می شود
- نیاز به نیتروژن مایع و انجماد نمونه رفع می شود
- آسیب به مجموعه RNA نمونه را به حداقل می رساند
- مناسب برای انجام تحقیقاتی که به جمع آوری نمونه نیاز دارند
- سازگار با اکثر روش های جداسازی RNA
- سازگار با بیان ژن و داده های پروفایل ژن
- بایگانی قابل اعتماد نمونه بدون تخریب RNA
