کیت استخراج RNA از نمونه های مختلف

با توجه به اهمیت بررسی ژنوم انواع بیماری ها و روش های متفاوتی که برای آن ها در نظر گرفته شده است ، اما همچنان یکی از روش های مورد استقبال که پایه و اساس بررسی ژنتیک جانداران می باشد و نیز در مقایسه با دیگر روش ها  ساده و کم هزینه محسوب می شود  همان کیت استخراج RNA به روش ستونی بوده که در اکثر آزمایشگاه ها و موسسات تحقیقی دنیا مورد توجه قرار گرفته و از اهمیت ویژه ای برخوردار است و شرکت های تجاری گونانی در دنیا اقدام به تولید و توزیع این نوع کیت ها در دنیا کرده اند.

درشت مولکول های RNA با وزن مولکولی بالا ، نقش بسیار مهمی تحت عنوان حامل کد های ژنتیکی در برخی از بیماری های ویروسی دارند. این مولکول ها به دلیل واکنش پذیری بالا و نیز مستعد هیدرولیز شدن ، از نظر ساختاری نسبت به DNA پایداری کمتری دارند .

شرکت یکتا تجهیز آزما بعنوان نماینده انحصاری کمپانی Favorgen تایوان ، اقدام به توزیع کیت استخراج RNA از نمونه های مختلف کرده است . این کیت دارای یک دستورالعمل استاندارد و چندین دستورالعمل بهینه شده برای نمونه های خاص و متفاوت می باشد .

با استفاده از کیت استخراج RNA از نمونه های مختلف ، می توانید پروسه ی استخراج RNA را از طیف گسترده ای از نمونه ها انجام دهید . شما می توانید از نمونه هایی نظیر خون کامل ، سلول جانوری ، بافت جانوری ، باکتری ، مخمر و بافت پارافینه  عمل استخراج RNA  را انجام دهید.  بعلاوه در مورد نمونه های خاص مانند بافت های گیاهی  با خرید محلول YTzol Pure RNA که فرمولاسیونی مشابه با ترایزول دارد و نیز ادغام دو روش ستونی و YTzol pure RNA می توانید با کمترین هزینه و بهینه ترین دستورالعمل جهت استخراج RNA برای نمونه های خاص و گیاهی اقدام کنید. برای دستیابی به دستورالعمل های بهینه شده برای نمونه های متفاوت می توانید به تب دستورالعمل در کیت استخراج RNA  مراجعه بفرمایید .

به طور کلی پایه و اساس کار در کیت استخراج RNA  روش مبتنی بر ستون می باشد . ویژگی این روش در تمامی برند ها خلوص بالای RNA و مقدار محصول کم است ولی در مقابل با استفاده از محلول ترایزول ، کاربر محصول زیاد و با خلوص کمتری در اختیار دارد. در این مواقع ، پیشنهاد می کنیم برای نمونه هایی که دارای مقدار قابل توجهی RNA هستند از کیت استخراج RNA استفاده کنید ولی اگر نمونه ی شما مقدار RNA کمتری دارد می توانید از محلول ترایزول با نام تجاری YTzol pure RNA استفاده کنید . در صورتیکه نمونه ی شما مقدار RNA کمی دارد و از طرفی درجه ی خلوص برای شما اهمیت دارد میتوانید  با استفاده از دستورالعمل بهینه شده  از هر دو روش در آزمایش خود استفاده کنید .

راهکار افزایش مقدار محصول RNA

در اینجا به بهینه سازی پروتکل های موجود می پردازیم و جهت  افزایش مقدار محصول RNA ، پیشنهاد می شود مراحل زیر را دنبال کنید :

با توجه به اینکه RNA موجود در خون به واسطه ی مقدار بالای Rnase  پایداری خیلی کمی نسبت به بافت دارد ، کاربر می بایست برای استخراج RNA از خون ، تا حد امکان از نمونه ی تازه خون استفاده نماید و تا حد امکان از نمونه های فریز شده اجتناب کند . همچنین  بهترین اقدام این است که بافی کوت خون را استخراج نماید و سریعا پروسه ی استخراج RNA  را آغاز کند و یا اینکه برای بافت قبل از شروع پروسه ی استخراج RNA از بافت ، از محلول RNAlater استفاده کند و پروسه ی استخراج RNA را به زمانی دیگر موکول کند .

نکته بسیار مهم در این فرآیند  اجتناب از فریز و یخ زدایی نمونه به صورت متناوب است .

استخراج RNA به روش ستونی

کیت استخراج RNA به روش ستونی  یه روش استخراج فاز جامد برای تمیز کردن سریع اسیدنوکلئیک است . در این روش  اسیدنوکلئیک تحت شرایط خاصی  به فاز جامد سیلیس متصل می شود . در کیت استخراج RNA روش و اساس کار به ترتیب زیر است :

لیز سلول ها

اتصال اسیدنوکلئیک به غشای ژل سیلیکا

شستن اسیدنوکلئیک متصل به غشای سیلیکا

و شستشوی اسیدنوکلئیک استخراج شده

در مرحله ی لیز شدن ، سلول های یک نمونه با روش لیتیک پردازش می شوند که در واقع همان شکسته شدن غشای سلولی و آزاد شدن اسیدنوکلئیک است .

در مرحله ی اتصال ، یک محلول بافر به همراه اتانول و یا ایزوپروپانول به نمونه اضافه می گردد و فرایند اتصال آغاز می گردد . محلول به یک ستون منتقل می شود  و ستون در سانتریفیوژ قرار می گیرد . در سانتریفیوژ در شرایطی که PH و غلظت نمک محلول در وضعیت بهینه ی خود باشد ، اسیدنوکلئیک با عبور از محلول به غشای ژل سیلیکا متصل می شود .

در فرایند شستشو ، یک بافر شستشو به ستون اضافه شده و سپس ستون مجددا” در سانتریفیوژ قرار داده می شود و شستشو آغاز می شود . در فرایند شستشو ، ناخالصی های باقی مانده از غشا خارج و فقط اسیدنوکلئیک متصل به ژل سیلیس باقی می ماند .

در شستشوی مرحله ی آخر ، یک بافر شستشوی دیگر به ستون اضافه می گردد و دوباره ستون را در سانتریفیوژ قرار داده و در این مرحله اسیدنوکلئیک از غشا خارج شده و از انتهای ستون جمع آوری می شود .

محصولات مرتبط :

محلول RNAlater | محلول YTzol Pure RNA | کیت استخراج DNA