آنزیم نوکلئاز
نوکلئازها آنزیم هایی هستند که قادر به هیدرولیز اسیدهای نوکلئیک می باشند. نحوه عملکرد آن ها به این صورت می باشد که از طریق شکستن پیوندهای فسفودی استری بین زیر واحدهای نوکلئوتیدی اسیدهای نوکلئیک باعث هیدرولیز اسید های نوکلئیک می گردند. دو نوع اصلی از نوکلئازها وجود دارد: (1) اگزونوکلئازها و (2) اندونوکلئازها.
عملکرد نوکلئازها
نوکلئازها به کلاس آنزیم هایی به نام هیدرولازها تعلق دارند و معمولاً عملکرد اختصاصی دارند. به طور مثال ، ریبونوکلئازها فقط بر روی اسیدهای ریبونوکلئیک (RNA) و دئوکسی ریبونوکلئازها فقط بر روی اسیدهای دئوکسی ریبونوکلئیک (DNA) اثر می کنند که به ترتیب RNase وDNase نامیده می شوند. وجود آنزیم های نوکلئازی مانند DNase و RNase در آب ، می توانند باعث تخریب نمونه های مولکولی ارزشمند و حتی باعث اشتباه شدن نتایج ازمایشات مولکولی گردند.
آب فوق خالص و عاری از نوکلئاز
برای جلوگیری از این موضوع و از دست رفتن نمونه های DNA و RNA ، ضروری است که از آب فوق خالص و عاری از نوکلئاز در کاربردهایی مانند PCR ، سنتز cDNA ، خالص سازی اسید نوکلئیک ، توالی یابی ، شبیه سازی و تهیه کتابخانه های Total RNA برای NGS یا (individual RNAs) iCLIP استفاده شود.
سخت ترین آنزیم برای از بین بردن در محیط آزمایشگاهی ، آنزیم RNase می باشد که به صورت پراکنده در همه جا وجود دارد. از مشخصات برجسته این آنزیم مقاومت بسیار بالای آن در برابر غیر فعال سازی حرارتی و شیمیایی است که منجر به تجزیه نمونه های با ارزشRNA در مدت زمان بسیار کوتاهی می شود .در نظر داشته باشید که صرفاً با اتوکلاو کردن تمام فعالیت RNase از بین نمی رود و برای از بین بردن و حذف آن نیاز به روش های مختلف از جمله فیلتراسیون و تیمار با دی اتیل پیروکربنات (DEPC) است. DEPC برای غیرفعال کردن ریبونوکلئازها مؤثر می باشد ، اما ممکن است سایر واکنش‌های آنزیمی را نیز تحت تأثیر قرار دهد. بنابراین DEPC-water برای in vivo و دیگر کاربردهای حساس تر توصیه نمی شود. آب عاری از نوکلئاز ، به منظور رقیق کردن غلظت معرف ها و رساندن آن ها به غلظت نهایی مناسب استفاده می شود. هم چنین ، استفاده از آب عاری از نوکلئاز به جلوگیری از تخریب DNA توسط نوکلئازها و هم چنین تداخل واکنش PCR توسط یون هایی که در غیر این صورت می توانند در آب دیونیزهِ عاری از نوکلئاز وجود داشته باشند ، کمک می کند.
جلوگیری از تخریب نمونه ها و معرف ها در آزمایشگاه
بنابراین استفاده از معرف‌ها و آب عاری از نوکلئاز ، مواد مصرفی پلاستیکی و عملکرد خوب آزمایشگاهی برای جلوگیری از تخریب نمونه‌ها و معرف‌ها ضروری می باشد. آب فوق خالص (UPW) آبی است که در سطوح بالایی تصفیه شده است. به عنوان استاندارد ، آب فقط حاوی H20 و هم چنین تعداد متعادلی از یون های H+ و OH- می باشد.
خصوصیات آب فوق خالص
این آب دارای مقاومت 18.2MΩ.cm و TOC <10 ppb و bacterial count <10 CFU/ml است. باکتری ها معمولاً در واحدهای تشکیل دهنده کلنی یا colony-forming units (CFU) گزارش می شوند. کربن آلی کل یا Total organic carbon (TOC) ، آلاینده‌های فلزی و آلاینده‌های آنیونی بر حسب قطعات در هر نماد اندازه گیری می‌شوند ، مانند ppm ، ppb ، ppt و ppq. برای طبقه بندی کردن آب به عنوان آب فوق خالص ، باید این فاکتور را در نظر گرفت که آب فوق خالص نباید حاوی اندوتوکسین های قابل تشخیص باشد.
این سطح از خلوص آن را به یک معرف عالی برای کارهای آزمایشگاهی از جمله تست های مولکولی و کشت سلولی تبدیل می کند. آب فوق خالص طی چندین مرحله تصفیه می شود تا استانداردهای کیفیت را برای کاربران مختلف برآورده کند. صنایع اولیه ای که ازUltrapure Water) UPW ) استفاده می کنند عبارتند از : نیمه هادی ها (semiconductors) ، فتوولتائیک های خورشیدی (solar photovoltaics) ، داروسازی (pharmaceuticals) ، تولید برق (دیگ های بخار فرعی و فوق بحرانی) ، و کاربردهای تخصصی مانند آزمایشگاه های تحقیقاتی و آزمایشگاه های مولکولی.
کاربرد های آب فوق خالص
1- کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC)
2- کروماتوگرافی مایع – طیف سنجی جرمی (LC-MS)
3- کروماتوگرافی گازی – طیف سنجی جرمی (GC-MS)
4- طیف سنجی جذب اتمی کوره گرافیت (GFAAS)
5- ایمونوشیمی (ICC)
6- در زمینه کشف دارو یا در پزشکی قانونی
7- در عرصه های مختلفی از جمله مولکولی ، سلولی ، داروسازی و …
8- در تست های مولکولی از جمله PCR , Real-time PCR , RT-PCR , سنتز cDNA …
9- کشت سلولی پستانداران
10- برای استخراج بیومولکول‌ها از نمونه ها ، بدون خطر آسیب آنزیمی به اجزای DNA و RNA
11- آنالایزرهای بالینی
دستگاه تولید آب فوق خالص عاری از نوکلئاز
آب فوق خالص عاری از نوکلئازِ شرکت یکتا تجهیز آزما ( Ultrapure Nuclease-Free Water ) تولید شده توسط دستگاه فوق تخصصی با فیلتر غشائی 0.22 میکرومتر ، با درجه HPLC بوده و دارای درجه بالایی از اشعه ماوراء بنفش (UV) ، با مقاومت 18.2MΩ می باشد.
این محصول عاری از RNase ،DNase ، پروتئیناز (Proteinase) ، پیروژن (Pyrogen) وهرگونه موجود زنده می باشد. این محصول جهت تهیه معرف ها و استفاده در واکنش های آنزیمی ایده آل می باشد. در تولید این آب از عوامل سمی مانند DEPC استفاده نشده تا بدین طریق از مهار واکنش های آنزیمی جلوگیری شود. این محصول تحت فیلتراسیون اسمز معکوس (RO) و دییونیزاسیون پیشرفته قرار می گیرد و به دنبال آن فیلتراسیون استریل انجام می شود. آب فیلتر شده فوق خالص و استریل ، بدون بازدارنده های قابل تشخیص ، آلاینده ها یا فعالیت آنزیمی می باشد. آب فوق خالص عاری از نوکلئازِ شرکت یکتا تجهیز آزما ، دارای گرید مولکولی می باشد و جهت استفاده در تست های مولکولی از جمله PCR ، RT-PCR و Real-time PCR در نظر گرفته شده است.
