عملکرد سایبرگرین
یکی از محصولاتی که تولید شرکت یکتا تجهیز آزما می باشد و پس از ارزیابی ، نتیجه و بازخورد چشمگیری در زمینه ی کار ریل تایم داشته است ، مسترمیکس سایبرگرین بوده است. مسترمیکس سایبرگرین یکتاتجهیزآزما با راندمان و نتیجه فوق العاده جهت تکنیک ریل تایم ( Real Time ) طراحی شده است .شرکت یکتا تجهیز آزما با تهیه آنزیم هات استارت ( hotstart Taq DNA polymerase ) از بهترین کمپانی اروپایی توانسته است کیفیت و حساسیت این محصول را نسبت به نمونه های مشابه خارجی در بازار ، بسیار بالا و بهینه حفظ کند . برای آشنایی با این محصول به شرح مختصری از روش ریل تایم می پردازیم :
همانطور که از معنی عبارت ریل تایم پی سی آر (Real time PCR) مشخص است این تکنیک بررسی لحظه به لحظه ی یک فرآیند می باشد . همچنین عوامل متعددی منجر به ابداع تکنیک ریل تایم شد که می توان به دشواری و عیوب های بسیار و متعدد در تکنیک پی سی آر ( PCR ) اشاره کرد . بنا براین احساس نیاز به یک تکنیک دقیق تر برای بررسی کمی و کیفی یک آزمایش ، نیاز به این روش را بیشتر کرد . تکنیک ریل تایم یک پروسه ی تشخیصی محسوب می شود که یک ماده فلورسنت عموما سایبرگرین ( SYBR Green) طی یک واکنش به مقدار محصول هر سیکل متصل و مقدار فلورسنت توسط یک ردیاب ( detector) ثبت می گردد .
برتری های روش ریل تایم و استفاده از مسترمیکس سایبرگرین
- در استفاده از روش ریل تایم ( Real Time PCR ) و استفاده از مسترمیکس سایبرگرین ، کاربر توانایی بررسی و مشاهده ی یک واکنش را در هر زمان دلخواه دارد و در هر سیکل واکنش میتوان فرآیند تکثیر را رویت و بررسی کرد .
- در روش ریل تایم و به دنبال آن استفاده از مسترمیکس سایبرگرین ، کاربر میتواند در صورت تمایل واکنش را با غلظت DNA مناسب ، پرایمر و تعداد سیکل را بهینه و تغییر دهد .
- همچنین در استفاده از ریل تایم و به دنبال آن استفاده از مسترمیکس سایبرگرین ، محقق می تواند اقدام به پایان دادن واکنش کند زیرا مراحل PCR کاملا قابل بررسی است و نیز پیرو آن ، رفتن به حالت سکون کاملا قابل ردیابی است .
- مقدار نسبی الگوی اولیه را می توان بررسی کرد.
- واکنش ها با سرعت بیشتری انجام پذیر است .
- حدود تشخیص آن نسبت به PCR معمولی بالاتر است .
با توجه به توضیحات بالا و بیان مزیت های روش ریل تایم ( Real time PCR) در زیر به اختصار در قالب سوالات متدوال ، به بررسی این محصول و ویژگی های مسترمیکس سایبرگرین می پردازیم :
عملکرد سایبرگرین چگونه است ؟
به طور خلاصه رنگ سایبرگرین یا به عبارتی SYBR Green ، با حضور بین دو پایه ی رشته ی DNA ، با مولکول های DNA اتصال بر قرار می کند . رنگ سایبرگرین یکی از اجزای تشکیل دهنده ی مسترمیکس سایبرگرین برای استفاده از واکنش های ریل تایم می باشد ، زیرا با حضور رنگ سایبرگرین ، کاربر می تواند میزان امپلیفای شدن DNA در پایان هر سیکل را اندازه گیری نماید .
علت اتصال سایبرگرین به مولکول های DNA چیست ؟
زمانی که پژوهشگر یا محقق اقدام به استفاده از مسترمیکس سایبرگرین می نماید ، در ابتدا پس از متصل شدن آغازگر ها ، مولکول های رنگی به رشته های دوتایی DNA وصل می شوند . این اتصال سبب بالا رفتن تعداد مولکول های سایبرگرین برای انتشار نور می گردد .همچنین هنگام افزایش طول DNA ، تعداد مولکول های رنگی بیشتری به DNA های سنتز شده وصل می گردد .
آیا رنگ سایبرگرین که در مسترمیکس سایبرگرین مورد استفاده قرار میگیرد به نور حساس است ؟
رنگ سایبرگرین مورد استفاده در مسترمیکس سایبرگرین نسبتا حساسیت کمی به نور دارد . با این حال کاربران باید توجه داشته باشند که در هر زمان که مقدور می باشد ، باید از مسترمیکس سایبرگرین در برابر نور محافظت کرد .
آیا رنگ سایبرگرین خطرناک و سرطان زا می باشد ؟
در این زمینه تحقیقات گسترده ای انجام شده است . رنگ موجود در مسترمیکس سایبرگرین از گروه رنگ های سیانین بوده که در آزمایش های تحقیقاتی بیولوژی مولکولی مورد استفاده قرار می گیرد و کاملا بی خطر است .
در مسترمیکس سایبرگرین از چه موادی استفاده شده است ؟
در ابتدا لازم به ذکر است که غلظت این مسترمیکس 2X بوده و نیز شامل KCl، dNTP ، MgCl2، آنزیم هات استارت ( Hotstart Taq DNA polymerase ) ، رنگ سایبرگرین و بافر مربوطه می باشد.
