طرز تهیه بافر تریس HCL

طرز تهیه بافر Tris-HCl 

بافر Tris-HCl چیست؟

بافر Tris-HCl یکی از پرکاربردترین محلول‌های بافری در زیست‌شناسی مولکولی، بیوشیمی و الکتروفورز است. این بافر از ترکیب Tris Base به‌همراه اسید کلریدریک (HCl) ساخته می‌شود و به دلیل پایداری بالا، کنترل دقیق pH و سازگاری با DNA و RNA، در بسیاری از پروتکل‌های آزمایشگاهی ضروری است.

⇐ خرید و قیمت محصول آماده Tris-HCL

 

 

طرز تهیه بافر Tris-HCl

طرز تهیه بافر Tris-HCl شامل حل کردن مقدار مشخصی از Tris Base در آب، تنظیم pH با HCl و تکمیل حجم نهایی است.

مواد و ابزار مورد نیاز

• پودر Tris Base
• اسید کلریدریک (HCl) رقیق
• آب دی‌یونیزه یا آب مقطر
• pH متر
• ارلن یا بشر شیشه‌ای
• همزن مغناطیسی یا میله همزن

بیشتر بخوانید  نقش Tris-HCl در استخراج DNA

مراحل تهیه بافر Tris-HCl

این مراحل به‌صورت ساده و قابل اجرا نوشته شده تا برای کاربر و موتور جستجو کاملاً قابل فهم باشد:

۱. وزن‌کردن مقدار مورد نیاز Tris Base

ابتدا مقدار محاسبه‌شده از پودر Tris Base را بر اساس غلظت مدنظر (مثلاً ۱M یا 0.5M) وزن کنید.
مثال: برای تهیه ۱ لیتر محلول ۱ مولار، حدود ۱۲۱٫۱۴ گرم Tris Base لازم است.

۲. حل کردن Tris در نصف حجم آب

پودر را در حدود ۵۰۰ میلی‌لیتر آب مقطر بریزید.
بهتر است ظرف روی همزن مغناطیسی قرار گیرد تا توده پودر سریع‌تر حل شود.

۳. تنظیم pH با استفاده از HCl

پس از حل شدن کامل پودر، pH محلول را اندازه‌گیری کنید.
با افزودن قطره‌ای و آرام HCl (معمولاً 1N یا 6N)، pH را به مقدار مورد نظر (معمولاً pH = 7.4 یا pH = 8.0) برسانید.

نکته مهم برای خوانایی و کیفیت آزمایش:

• HCl را آهسته اضافه کنید.
• بین هر بار افزودن، اجازه دهید pH ثابت شود.

۴. رساندن حجم محلول به مقدار نهایی

بعد از تنظیم pH، محلول را داخل بالن ژوژه ریخته و با آب مقطر تا حجم نهایی ۱ لیتر برسانید.

۵. ذخیره‌سازی محلول

محلول Tris-HCl را در بطری شیشه‌ای یا پلی‌اتیلن دربسته و در دمای اتاق یا یخچال نگهداری کنید.
اگر در محیط حساس استفاده می‌شود، می‌توان آن را اتوکلاو یا فیلتراسیون استریل کرد.

نکات مهم هنگام تهیه بافر Tris-HCl

• Tris نسبت به تغییر دما حساس است؛ بنابراین pH باید در دمای اتاق تنظیم شود.
• مراقب باشید که HCl بیش از حد اضافه نکنید، چون باعث افت ناگهانی pH می‌شود.
• از الکترود pH مناسب و عاری از آلودگی استفاده کنید.
• این بافر در بسیاری از پروتکل‌ها پایه اصلی محلول‌های TAE، TBE و TE محسوب می‌شود.

تفاوت تریس HCL با تریس بیس (تریس آمینومتان)

تفاوت اصلی بین Tris-HCl و Tris Base در حالت شیمیایی و کاربرد آن‌ها در تنظیم pH است. Tris Base شکل پایه‌ای و خنثی تریس است که بدون افزودن اسید یا بافر، pH آن معمولاً بالاست و به تنهایی برای بسیاری از واکنش‌ها مناسب نیست. در مقابل، Tris-HCl همان Tris Base است که با اسید کلریدریک (HCl) ترکیب شده و pH آن به مقدار مشخص و پایدار (معمولاً 7.4 یا 8.0) تنظیم شده است. بنابراین، Tris-HCl یک محلول بافری آماده و پایدار است که به راحتی می‌توان از آن در آزمایش‌های بیوشیمی و مولکولی استفاده کرد، در حالی که Tris Base نیاز به تنظیم pH دارد تا بتواند نقش بافر را ایفا کند.

تریس آمینیومتان

⇐ خرید تریس بیس یا تریس  آمینومتان

 

جمع‌بندی

بافر Tris-HCl یکی از محلول‌های پایه در آزمایشگاه‌های زیست‌شناسی است و تهیه آن شامل چهار مرحله ساده است: حل کردن Tris Base، تنظیم pH با HCl، تکمیل حجم نهایی و ذخیره‌سازی. این مراحل در کنار کنترل دقیق دما و pH، یک بافر پایدار و استاندارد فراهم می‌کند که در اغلب کارهای بیومولکولی قابل استفاده است.

سوالات متداول درباره Tris-HCl