استخراج DNA ژنومی
با توسعه علوم وفن آوری در حوزه ی زیست‌شناسی مولکولی ، محققان و پژوهشگران به مطالعه ی زیستی جانداران در پایه ی مولکولی می پردازند . این بخش از علوم زیست شناسی بسیار مشابه با علوم ژنتیک و بیوشیمی می باشد . در واقع در یک توضیح مختصر ، علوم زیست شناسی مولکولی درک ، دریافت و تأثیر متقابل دو یا چند مولکول و نیرویی است که بین مولکول ها وجود دارد و باعث انسجام جامدات مولکولی می شود و این تعامل و ارتباط در واقع ارتباط بین مولکول های DNA و RNA ، پروتئین و بیوسنتز آن ها در جانداران است. همچنین محققان و پژوهشگران به مطالعه ، بررسی و تنظیم این ارتباطات می پردازند .
کیت ستونی استخراج DNA از خون
برای دسترسی به تمامی این ارتباطات ، مطالعه و بررسی بین مولکول های DNA و RNA ، محقق به کیت استخراج DNA ژنومیک نیاز دارد. شرکت یکتا تجهیز آزما با ارائه ی کیت استخراج DNA ژنومیک از خون با نام تجاری Blood DNA extraction mini kit و شماره کاتالوگ FABGK001 در بسته بندی 50 تستی نماینده ی انحصاری کمپانی Favorgen تایوان می باشد . طبق پروتکل شما با استفاده از این کیت می توانید برای نمونه های خون کامل ، سرم ، پلاسما ، مایعات بدن و سلول کشت داده شده ، استخراج DNA انجام دهید. همچنین طبق رکورد هایی که از محققان و پژوهشگران عزیزمان داشتیم ، بغیر از نمونه های ذکر شده در دستورالعمل ، می توانید فرآیند استخراج DNA ژنومیک از مایع آمنیوتیک و یا ادرار را نیز به سادگی انجام دهید و DNA با کیفیت و غلظت کافی جهت انجام واکنش های PCR را در دسترس داشته باشید .
بطور کلی گاهی به دلایل متفاوت ممکن است غلظت DNA ژنومیک استخراج شده کافی و مناسب نباشد . در این شرایط ، در ابتدا پیشنهاد می کنیم هنگام استخراج DNA ژنومیک ، حتی المقدور برای نمونه به جای خون کامل از بافی کوت استفاده کنید که در اینصورت 5 تا 10 برابر ، مقدار محصول استخراج شده ی شما بیشتر می شود . همچنین می توانید به جدول رفع اشکال (Troubleshooting) در انتهای دستورالعمل نیز رجوع کنید .
نقش پروتئیناز K در استخراج DNA
کیت استخراج DNA ژنومیک همراه با پروتئیناز K ارائه می گردد . برای حفظ پایداری فعالیت آنزیمی پروتئینازK ، توجه داشته باشید که هنگام دریافت کیت استخراج DNA ژنومیک ، در داخل بسته یک ویال پروتئیناز K بصورت پودر لیوفیلیزه موجود است. در ابتدای پروسه ، همانطور که در دستورالعمل اشاره شده است پودر لیوفیلیزه پروتئیناز K را با آب دو بار تقطیر مخلوط کرده و در یخچال نگهداری کنید . البته توجه داشته باشید که این دستورالعمل پروتئیناز K برای آن دسته از کاربرانی می باشد که کیت استخراج DNA ژنومیک را ظرف مدت یک یا دو روز به طور کامل استفاده می کنند . در صورتیکه معمولا محققان این کیت را طی چند ماه استفاده می کنند و همین امر باعث کاهش و یا از بین رفتن فعالیت آنزیم پروتئیناز K ، می گردد . در این صورت به محققان پیشنهاد می شود پس از آماده سازی پروتئیناز K ، محلول را بر حسب نیاز تقسیم و در فریزر نگهداری کنید و برحسب نیاز و تناسب استفاده از فریزر خارج کنید .
مراحل استخراج DNA از خون
همانطور که در بالا اشاره شد شرکت یکتا تجهیز آزما نماینده انحصاری کمپانی Favorgen تایوان می باشد .کیت استخراج DNA ژنومیک با متد ستونی و همراه با پروتئیناز K ارائه می شود . این کیت شامل مراحل زیر می باشد :
- مرحله ی لیز کردن
- مرحله ی Binding
- مرحله ی شستشو
- مرحله ی Eluting
سه نوع لیز کننده در استخراج DNA
امتیاز و وجه تمایز این کیت ، ارائه ی پروتئیناز K بصورت لیوفیلیزه و با مرغوب ترین و بالاترین فعالیت آنزیمی می باشد . به طور کلی در کیت های استخراج DNA ژنومیک از سه نوع ماده لیز کننده به شرح ذیل استفاده می کنند :
Protease
پروتئیناز K
RBC Lysis
استفاده از پروتئیناز K از دو روش دیگر مرغوب تر ، بهینه تر و گران تر است . در واقع پروتئیناز K زمان کمتری برای لیز کردن نیاز دارد. همچنین پروتئیناز K بعنوان بهترین لیز کننده برای نمونه های خون فریز شده ، خون تازه و یا خون خشک استفاده می شود در حالیکه RBC Lysis برای نمونه های خون تازه بهینه و کارآمد می باشد. کاربر با ماده ی لیز کننده پروتئیناز K قادر است فرآیند استخراج DNA ژنومیک را از طیف گسترده ای از نمونه ها با بالاترین کیفیت و خلوص کافی انجام دهد .
یکی از مهمترین اقداماتی که در تولید کیت استخراج DNA ژنومیک کمپانی Favorgen شده است ، استفاده از یکی از مرغوب ترین غشای سیلیکایی در ستون کیت ها است که منجر به خلوص بالا و مقدار محصول مناسب در فرآیند استخراج DNA شده است . گنجایش محصول ستون های این کیت تا 50 میکروگرم تخمین زده شده و در آزمایشهای عملی برای نمونه های خون بین 4 تا 12 میکروگرم محصول و برای نمونه های سلول بین 20 تا 40 میکروگرم محصول را می توان انتظار داشت.
