تفاوت‌های بین آب DEPC با آب های خالص
تفاوت‌های بین آب DEPC و آب فوق خالص و آب نوکلئاز فری
تعریف:
- آب DEPC یا آب دی‌اتیل‌پیروکربونات (DEPC) شده، به منظور حذف فعالیت‌های آنزیمی به ویژه RNAse ها استفاده می‌شود
واکنش های مولکولی DEPC با گروه‌های هیدروکسیل و آمین در RNAseها ، آن‌ها را به مولکول‌های غیر فعال تبدیل می‌کند.
پس از انجام واکنش با DEPC ، آب به مدت چند ساعت در دمای ۱۰۰ درجه سانتی‌گراد جوشانده می‌شود تا DEPC باقی‌مانده و محصولات جانبی حذف شوند.
- آب فوق خالص : آب بسیار خالص است که به دقت از مواد آلی و معدنی، ذرات معلق، باکتری‌ها، و دیگر آلاینده‌ها تصفیه شده است. این نوع آب در آزمایش‌های حساس و دقیق نیازمند خلوص بالا استفاده می‌شود.
فرآیندهای مورد استفاده: شامل تقطیر چند مرحله‌ای، اسمز معکوس، یون‌زدایی، فیلتراسیون نانویی و اشعه‌ی UV برای حذف تمام آلاینده‌ها.
خلوص: آب فوق خالص به گونه‌ای تصفیه می‌شود که کمتر از ۱ میکروگرم آلاینده در لیتر داشته باشد. میزان خلوص آن با استفاده از مقاومت الکتریکی بالای ۱۸.۲ مگااهم سنجیده می‌شود.
- آب فوق خالص نوکلئاز فری یاUltra pure Nuclease-Free Water نوع خاصی از آب است که با فرآیندهای دقیق تصفیه شده تا تمامی آنزیم‌های نوکلئازی از آن حذف شود. این نوع آب برای تحقیقات زیست‌مولکولی و بیوتکنولوژی اهمیت زیادی دارد که دارای سه ویژگی مهم ذیل را است:
خلوص بالا: تمامی آنزیم‌های نوکلئاز شامل DNAse و RNAse از این آب حذف شده‌اند.استریل بودن: معمولاً آب نوکلئاز فری برای جلوگیری از آلودگی‌های میکروبی، استریل می‌شود.عدم وجود آلاینده‌ها: به‌طور کامل از هرگونه ترکیب شیمیایی آلاینده پاک شده است.
فرآیند تهیه:
- آب DEPC : برای تهیه آب DEPC ، به هر لیتر آب، ۱ میلی‌لیتر DEPC افزوده و مخلوط به مدت ۳۰ دقیقه در دمای ۳۷ درجه سانتی‌گراد نگهداری می‌شود. سپس آب به مدت چند ساعت در دمای ۱۰۰ درجه سانتی‌گراد جوشانده می‌شود تا DEPC باقی‌مانده حذف شود.
- آب فوق خالص: از فرآیندهای مختلفی مانند تقطیر، اسمز معکوس، و فیلتراسیون برای حذف تمام آلاینده‌ها استفاده می‌شود. این فرآیندها شامل مراحل متعددی هستند تا آب به درجه‌ای از خلوص برسد که هیچ ترکیب آلوده‌کننده‌ای باقی نماند.
- برای تهیه آب نوکلئاز فری، از فیلترهای بسیار دقیق، دیالیز و فرآیندهای شیمیایی استفاده می‌شود. معمولاً این آب بعد از تصفیه از طریق اتوکلاو یا فیلتراسیون میکروبیولوژیک، استریل می‌شود.
کاربردها:
- آب DEPC :
تحقیقات RNA : برای جلوگیری از تخریب RNA توسط RNAse ها، در مراحل استخراج، تخلیص و ذخیره‌ی RNA استفاده می‌شود.
آزمایش‌های PCR و RT-PCR : به عنوان یک محیط بدون RNAse برای اجرای دقیق و بدون تداخل این آزمایش‌ها.
- آب فوق خالص:
کاربردهای صنعتی: در تولید نیمه‌هادی‌ها، ساخت داروها و تولید محصولات شیمیایی حساس به خلوص آب.
آزمایش‌های تحلیلی: مانند HPLC (کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) و ICP-MS (طیف‌سنجی جرمی پلاسما جفت شده القایی) که نیازمند آب با خلوص بسیار بالا هستند.
- آب فوق خالص نوکلئاز فری:
تحقیقات RNA و DNA : به منظور استخراج، تخلیص و ذخیره RNA و DNA مورد استفاده قرار می گیرد. زیرا حضور نوکلئازها باعث تخریب این اسیدهای نوکلئیک شود.
آزمایش‌های PCR و RT-PCR : در این آزمایش‌ها نیاز به محیط بدون نوکلئاز است تا دقت و صحت نتایج تضمین شود.
ساخت محلول‌ها و واکنش‌ها: تهیه محیط‌ها و محلول‌های آزمایشگاهی که حساس به حضور نوکلئازها هستند.
مزایا:
- آب DEPC:
- مزایا: حذف کامل RNAse ها، جلوگیری از تخریب RNA، کاربرد ویژه در تحقیقات مولکولی.
- معایب: نیاز به جوشاندن طولانی برای حذف DEPC باقی‌مانده.
- آب فوق خالص:
- مزایا: خلوص بسیار بالا، مناسب برای گستره وسیعی از کاربردهای صنعتی و آزمایشگاهی.
- معایب: فرآیندهای پیچیده و گران‌قیمت برای تهیه.
- آب فوق خالص نوکلئاز فری:
مزایا :حفظ نمونه‌های بیولوژیکی: عدم وجود نوکلئازها از تخریب نمونه‌ها جلوگیری می‌کند.
استفاده گسترده در تحقیقات: برای بسیاری از واکنش‌های زیست‌مولکولی که نیاز به محیط بدون نوکلئاز دارند، ضروری است.
- معایب: فرآیندهای گران‌قیمت برای تهیه.
- نتیجه‌گیری:
در نهایت، هر سه نوع آب اهمیت زیادی در زمینه‌های خاص خود دارند. آب DEPC به طور ویژه برای حذف RNAseها و جلوگیری از تخریب RNA در تحقیقات مولکولی استفاده می‌شود، در حالی که آب فوق خالص به دلیل خلوص بسیار بالا در آزمایش‌های دقیق و کاربردهای صنعتی حساس به خلوص آب مورد استفاده قرار می‌گیرد. انتخاب بین این دو نوع آب باید بر اساس نیازهای خاص و محیط کاری انجام شود. آب فوق خالص نوکلئاز فری یاUltra pure Nuclease-Free Water نوع خاصی از آب است که با فرآیندهای دقیق تصفیه شده تا تمامی آنزیم‌های نوکلئازی از آن حذف شود. این نوع آب برای تحقیقات زیست‌مولکولی و بیوتکنولوژی اهمیت زیادی دارد. آب نوکلئاز فری یک ابزار حیاتی در تحقیقات مولکولی و بیوتکنولوژی است. با تضمین عدم حضور آنزیم‌های نوکلئازی، این نوع آب به حفظ نمونه‌های بیولوژیکی و صحت نتایج آزمایش‌ها کمک می‌کند. انتخاب دقیق و استفاده از آب نوکلئاز فری می‌تواند باعث بهبود کارایی و دقت در آزمایش‌های زیست‌مولکولی شود.
