استخراج DNA/RNA در روش ستونی
استخراج DNA/RNA :
استخراج DNA/RNA مبتنی بر ستون یک روش استخراج فاز جامد برای تمیز کردن سریع اسیدهای نوکلئیک است . این روش به این واقعیت متکی است که اسید نوکلئیک تحت شرایط خاصی به فاز جامد سیلیس متصل می شود.
مراحل کار در استخراج DNA/RNA:
مراحل کار در استخراج DNA/RNA به روش ستونی لیز سلولها ، اتصال اسید نوکلئیک به غشای ژل سیلیکا ، شستن اسید نوکلئیک متصل به غشای ژل سیلیکا و شستشوی اسید نوکلئیک است.
مرحله لیز شدن در استخراج اسیدنوکلئیک :
برای لیز شدن ، سلولهای یک نمونه با روش لیتیک پردازش می شوند که همان شکستن غشای سلولی و آزاد سازی اسید نوکلئیک است.
مرحله اتصال در استخراج اسیدنوکلئیک :
برای اتصال ، یک محلول بافر به همراه اتانول یا ایزوپروپانول به نمونه اضافه می شود . این فرایند اتصال را تشکیل می دهد. محلول به یک ستون منتقل می شود و ستون در سانتریفیوژ قرار می گیرد . در سانتریفیوژ ، درصورت بهینه بودن pH و غلظت نمک محلول ، اسید نوکلئیک با عبور از محلول به غشای ژل سیلیکا متصل می شود.
مرحله شستن در استخراج اسیدنوکلئیک :
در مرحله شستن ، یک بافر شستشو به ستون اضافه می شود. ستون مجدداً در سانتریفیوژ قرار داده می شود و بافر را شستشو می دهد. این باعث می شود ناخالصی های باقیمانده از غشاء خارج شود و فقط اسید نوکلئیک متصل به ژل سیلیس بماند.
شستشوی آخر در استخراج اسیدنوکلئیک :
برای شستشو مرحله آخر ، یک بافر شستشو دیگر به ستون اضافه می شود. ستون مجدداً در سانتریفیوژ قرار داده می شود بافر شستشو اسید نوکلئیک را از غشاء خارج کرده و اسید نوکلئیک از انتهای ستون جمع می شود.
به اختصار استخراج DNA/RNA به روش ستونی منوط به حذف پروتئین‌های سلولی و هیستونی متصل به دی‌ان‌ای میباشد که به سه روش زیر انجام میگیرد:
- با اضافه کردن پروتئاز
- از طریق رسوب دهی پروتئین‌ها با سدیم یا آمونیوم سولفات
- یا خارج سازی آن‌ها از طریق یک ترکیب فنل- کلروفرم که این کار باید قبل از رسوب دادن دی‌ان‌ای انجام گیرد.
پس از استخراج، دی‌ان‌ای را به آرامی در یک بافر قلیایی (معمولاً در بافر TE )یا در آب خالص حل می‌کنند.
