استخراج DNA به روش Salting Out

ارسال توسط

در تاریخ

روش Salting Out یا روش سالتینگ اوت یکی از تکنیک‌های ساده و مقرون‌به‌صرفه استخراج DNA است که با استفاده از نمک‌های محلول، پروتئین‌ها را رسوب می‌دهد و DNA را در فاز مایع نگه می‌دارد. این روش به دلیل سادگی و هزینه پایین، در آزمایشگاه‌های مختلف کاربرد گسترده‌ای دارد.

فهرست مطالب

استخراج DNA به روش Salting Out

رسوب‌دهی با نمک (Salting Out) یک روش ساده و ایمن برای استخراج DNA است که در آن با افزودن غلظت بالای نمک، پروتئین‌ها و ناخالصی‌ها رسوب کرده و DNA خالص در محلول باقی می‌ماند.

این روش به‌دلیل عدم نیاز به حلال‌های سمی مانند فنل، کم‌هزینه و مناسب برای استخراج DNA ژنومی از نمونه‌های مختلف (خون، بزاق، بافت) است.

مراحل اصلی استخراج DNA با روش Salting Out:

لایز سلولی: سلول‌ها با محلول لایز و آنزیم پروتئیناز K شکسته می‌شوند تا دیواره و غشاهای سلولی از هم جدا شوند.
افزودن نمک: افزودن نمک‌های اشباع‌شده مانند NaCl باعث رسوب پروتئین‌ها می‌شود و DNA در محلول باقی می‌ماند.
تفکیک DNA: محلول به کمک سانتریفیوژ از پروتئین‌ها جدا می‌شود.
رسوب DNA: با افزودن اتانول سرد یا ایزوپروپانول، DNA رسوب می‌کند و پس از سانتریفیوژ قابل برداشت است.
شست‌وشو و خشک‌سازی: DNA با اتانول ۷۰٪ شسته و سپس خشک می‌شود.
انحلال: DNA خشک شده در آب یا بافر TE حل می‌شود و برای کاربردهای بعدی آماده است.

بیشتر بخوانید : استخراج dna به روش ستونی

مزایا و معایب

مزایا:
- هزینه کم و مواد شیمیایی ایمن
- سادگی و سرعت اجرا
- مناسب برای کاربردهای PCR و توالی‌یابی
معایب:
- نیاز به دقت بالا در سانتریفیوژ و شست‌وشو
- امکان آلودگی متقاطع در صورت رعایت نکردن اصول بهداشتی

کاربردهای روش Salting Out

روش سالتینگ اوت معمولاً در آزمایشگاه‌های تشخیص پزشکی، تحقیقاتی و بیوتکنولوژی برای استخراج DNA از نمونه‌های خون، بافت و سلول‌های حیوانی و انسانی استفاده می‌شود. این روش به دلیل هزینه پایین و کارایی قابل قبول، گزینه‌ای محبوب در محیط‌های با منابع محدود است.

مقایسه با روش‌های دیگر

در مقایسه با روش فنل-کلروفرم، Salting Out ایمن‌تر است و مواد شیمیایی خطرناک ندارد، اما ممکن است خلوص DNA کمی کمتر باشد. در مقابل کیت‌های تجاری، ارزان‌تر است ولی زمان‌برتر است و نیاز به مراحل دستی دارد.