استخراج DNA از خون به روش جوشاندن (Boiling Method)

استخراج DNA از خون به روش جوشاندن (Boiling) یک تکنیک سریع، کم‌هزینه و آسان برای استخراج DNA از نمونه‌های خون است. این روش برای مواردی که نیاز به خلوص بسیار بالا نیست اما سرعت و سادگی اهمیت دارد، ایده‌آل است. اساس این روش استفاده از حرارت بالا برای لیز سلول‌ها و دناتوره کردن پروتئین‌ها است.

مواد و تجهیزات مورد نیاز

• نمونه خون کامل (با ضد انعقاد EDTA)

• بافر لیز (Tris-HCl 10 mM, EDTA 1 mM, Triton X-100 0.5%)

• حمام آب گرم (۹۵-۱۰۰ درجه سانتیگراد) یا بلاک هیت

• سانتریفیوژ

• اتانول ۷۰% و ۱۰۰%

• بافر TE (Tris-EDTA) برای حل کردن DNA استخراج شده

• لوله‌های اپندورف

خرید کیت استخراج DNA از خون یکتاتجهیز آزما

مراحل استخراج DNA به روش جوشاندن

۱- آماده‌سازی نمونه

• ۱۰۰ میکرولیتر خون را با ۵۰۰ میکرولیتر بافر لیز مخلوط کنید.

• به مدت ۵ دقیقه در دمای اتاق انکوبات کنید تا گلبول‌های قرمز لیز شوند.

۲- مرحله جوشاندن

• نمونه را به مدت ۱۰ دقیقه در حمام آب گرم 95 تا 100 درجه سانتی گراد قرار دهید.

• این مرحله باعث:

  • لیز کامل سلول‌های سفید و آزادسازی DNA

  • دناتوره شدن پروتئین‌ها و آنزیم‌های تخریب‌کننده DNA

  • غیرفعال کردن پاتوژن‌های احتمالی

۳- سانتریفیوژ

• نمونه را به مدت ۵ دقیقه با دور ۱۲۰۰۰×g سانتریفیوژ کنید.

• سوپرناتانت حاوی DNA را به لوله جدید منتقل کنید.

• رسوب حاوی پروتئین‌های دناتوره شده را دور بریزید.

۴- رسوب دهی DNA

• به سوپرناتانت، ۲ حجم اتانول ۱۰۰% سرد اضافه کنید.

• به آرامی مخلوط کنید تا DNA رسوب کند.

• DNA را با قلاب شیشه‌ای یا سمپلر جمع‌آوری کنید.

۵- شستشو و حل کردن DNA

• DNA را با اتانول ۷۰% شستشو دهید تا نمک‌های اضافی حذف شوند.

• پس از خشک شدن در دمای اتاق، DNA را در ۵۰ میکرولیتر بافر TE یا آب مقطر حل کنید.

• در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد نگهداری کنید.

مزایای روش جوشاندن

•  سریع (کمتر از ۳۰ دقیقه)

•  کم‌هزینه و بدون نیاز به کیت‌های تجاری

•  مناسب برای غربالگری سریع نمونه‌ها

•  نیاز به تجهیزات حداقلی

•  امکان پردازش تعداد زیادی نمونه به صورت همزمان

معایب و محدودیت‌ها

•  خلوص پایین‌تر نسبت به روش‌های استاندارد

•  امکان تخریب DNA در دمای بالا

•  مناسب برای کاربردهای حساس (مانند توالی‌یابی)

•  بازده متغیر بسته به نوع نمونه

•  وجود مهارکننده‌های احتمالی در نمونه

کاربردهای روش

• تست‌های غربالگری اولیه

• PCR معمولی

• تشخیص‌های سریع مولکولی

• آزمایشگاه‌های با منابع محدود

• پروژه‌های دانشجویی و آموزشی

بیشتر بخوانید PCR چیست؟

نکات کلیدی برای موفقیت

• از خون تازه یا منجمد شده صحیح استفاده کنید

• زمان جوشاندن را دقیقا کنترل کنید (۱۰ دقیقه است)

• از اتانول سرد برای رسوب دهی استفاده کنید

• برای افزایش خلوص می‌توان از پروتئیناز K قبل از مرحله جوشاندن استفاده کرد

• pH بافرها را دقیقا تنظیم کنید

کنترل کیفیت

• اندازه‌گیری خلوص DNA با اسپکتوفتومتر (نسبت A260/A280)

• بررسی کیفیت DNA با الکتروفورز ژل آگارز

• تست عملکرد DNA با PCR

مقایسه روش های استخراج DNA

روش جوشاندن ،روش فنل کلروفرم و کیت استخراج DNA فیورژن(مبتنی بر ستونی)

خرید کیت استخراج DNA فیورژن از یکتاتجهیز آزما

نکات ایمنی

• استفاده از دستکش و عینک محافظ

• کار در زیر هود بیولوژیک

• دفع صحیح ضایعات بیولوژیک

• رعایت اصول کار با مواد شیمیایی

این روش برای استخراج سریع DNA از خون در مواردی که خلوص بسیار بالا مورد نیاز نیست، بسیار مناسب است. برای کاربردهای حساس توصیه می‌شود از روش‌های استانداردتر مانند فنل-کلروفرم یا کیت‌های تجاری استفاده شود.

بیشتر بخوانید بهترین کیت استخراج DNA و RNA