استخراج DNA از پرزهای جنینی

استخراج DNA از پرزهای جنینی

استخراج DNA از پرزهای جنینی  (CVS)، یکی از حساس‌ترین مراحل در فرآیندهای تشخیص پیش از تولد (PND) است؛ چرا که موفقیت آزمایش‌های بعدی مانند PCR، تعیین جنسیت، یا بررسی اختلالات ژنتیکی، کاملاً به خلوص و سلامت DNA استخراج‌شده بستگی دارد.

پرزهای جنینی (Chorionic Villus Sampling – CVS) یکی از ارزشمندترین و در عین حال حساس‌ترین منابع زیستی در حوزه تشخیص‌های پیش از تولد (PND) به شمار می‌روند. این بافت که از جفت منشأ می‌گیرد، حاوی همان اطلاعات ژنتیکی است که در سلول‌های جنین در حال رشد وجود دارد.

به همین دلیل، استخراج DNA ژنومیک از این پرزها، سنگ بنای شناسایی زودهنگام انواع اختلالات کروموزومی، بیماری‌های تک‌ژنی (مانند تالاسمی، هموفیلی و اس‌ام‌ای) و تعیین جنسیت در هفته‌های نخست بارداری (معمولاً هفته‌های ۱۱ تا ۱۴) است.

بیشتر بخوانید : ” استخراج DNA از مایع آمنیوتیک | آمینیوسنتز چیست؟ “

 

با این حال، کار با این بافت به دلیل ماهیت بیولوژیکی آن با چالش‌های منحصربه‌فردی همراه است. کوچک‌ترین نقص در جداسازی یا آلودگی نمونه با بافت‌های مادری (Maternal Cell Contamination)، می‌تواند به نتایج کاذب و تشخیص‌های اشتباهِ سرنوشت‌ساز منجر شود. از این رو، انتخاب یک روش استخراج که بتواند بالاترین بازدهی، خلوص و سلامت زنجیره‌های DNA را از کمترین حجم بافت ممکن تضمین کند، برای موفقیت تکنیک‌های حساس پایین‌دستی مانند PCR، تعیین توالی (Sequencing) و مایکرواری (Microarray) امری حیاتی است.

در میان راهکارهای موجود، سیستم‌های استخراج مبتنی بر ستون‌های سیلیکایی، به دلیل سرعت بالا، عدم نیاز به حلال‌های سمی مانند کلروفرم و فنول، و توانایی حذف مؤثر بازدارنده‌های آنزیمی، به عنوان استانداردی مطمئن در آزمایشگاه‌های ژنتیک پزشکی شناخته می‌شوند. این رویکرد به محققان اجازه می‌دهد تا در کوتاه‌ترین زمان، به فرآورده‌ای کاملاً خالص و آماده برای دقیق‌ترین آنالیزهای ملوکولی دست یابند.

استفاده از کیت استخراج DNA از بافت کمپانی Favorgen  تایوان (Tissue DNA Extraction Mini Kit) به دلیل بهره‌گیری از سیستم ستونی (Spin Column) و بافر‌های بهینه‌سازی شده، یک راهکار کارآمد، سریع و مطمئن برای این نوع نمونه‌های حساس به شمار می‌رود.

Tissue-genomic-DNA-extraction-mini-kit.yektatajhiz

به طور کلی، فرآیند استخراج از این بافت با این کیت شامل سه فاز اساسی است:

• جداسازی دقیق و هضم بافتی: در ابتدا بسیار حیاتی است که پرزهای جنینی زیر میکروسکوپ از بافت‌های مادری پاکسازی شوند تا از آلودگی ژنتیکی مادری (MCC) جلوگیری شود. سپس بافت جنینی با کمک بافر لایز و آنزیم پروتئیناز K موجود در کیت، به طور کامل هضم شده و دیواره سلول‌ها برای آزادسازی تکه‌های DNA شکسته می‌شود.
• اتصال اختصاصی به ستون (Binding): در این مرحله، با افزودن بافر اتصال و اتانول، شرایطی فراهم می‌شود که DNA به غشای سیلیکایی ستون‌های اختصاصی متصل شود، در حالی که پروتئین‌ها و سایر مواد زائد سلولی از غشا عبور کرده و در مراحل بعدی با بافر‌های شستشوی کیت (W1 و W2) کاملاً پاکسازی می‌شوند.
• جداسازی نهایی (Elution) :در نهایت، DNA باکیفیت و خالص که به ستون چسبیده بود، توسط بافر الوشنِ گرم شده، بازیافت (Elute) می‌شود. از آنجایی که حجم بافت جنینی معمولاً محدود است، تنظیم حجم بافر الوشن در این کیت به محققان اجازه می‌دهد تا به بالاترین غلظت و کیفیت ممکن از DNA ژنومیک برای تست‌های تشخیصی پیشرفته دست پیدا کنند.

این کیت با حذف مؤثر بازدارنده‌های آنزیمی، تضمین می‌کند که DNA به دست آمده کاملاً آماده استفاده در تکنیک‌های حساس مولکولی است.