ایکس گال|X-Gal
ایکس گال| X-Gal یا برومو 4 کلر و 3 ایندولیل β D گالاکتوپانوزوزید یا BCIG یک سوبسترای پرکاربرد به منظور تشخیص فعالیت بتاگالاکتوزیداز است . آنزیم بتاگالاکتوزیداز با برش باند بتاگلیکوزیدی در ساختار x-Gal منجر به ایجاد یک رنگ آبی می شود، بنابراین حضور رنگ آبی در حضور X-Gal بیانگر بیان ژن بتاگالاکتوزیداز می باشد.
X-Gal یک ماده بی رنگ است که با قرار گرفتن DNA خارجی در ناحیه lacZ ، منجر به عدم بیان بتاگلوکوزیداز شده بنابراین کلون های مشاهده شده فاقد رنگ بوده و در صورت عدم قرارگرفتن DNA خارجی ، بتاگالاکتوزیداز بیان شده و کلنی هایی با رنگ آبی مشاهده میشود. در فرایند کلونینگ، این ماده به همراه IPTG به منظور انجام غربالگری آبی-سفید در تشخیص کلنی های نوترکیب از غیرنوترکیب استفاده می شود .
کاربرد ایکس گال :
- تشخیص فعالیت بتاگالاکتوزیداز
- بررسی بیان بتاگالاکتوزیداز
- انجام غربالگری آبی و سفید توسط ایکس گال X-GAL
روش آماده سازی X-Gal ایکس گال :
20mg از پودر X-Gal را وزن کرده و در 1 میلی لیتر DMF(Dimethylformamide) یا DMSO حل کنید(20mg/ml) . سپس10µl از آنرا به 1 میلی لیتر از محیط کشت اضافه کنید.
شرایط نگهداری XGal:
- در دمای 20 – درجه سانتی گراد نگهداری شود.
- در تاریکی و به دور از نور نگهداری شود.
