مستر میکس ریل تایم اسمارت سایبر گرین | Smart SYBR Green qPCR mastermix

 مسترمیکس ریل تایم اسمارت سایبر گرین ( Smart SYBR Green qPCR mastermix )

مسترمیکس ریل تایم اسمارت سایبر گرین  Smart SYBR Green mastermix qPCR یک مستر میکس تجاری آماده استفاده است.این مستر با بهره وری و قدرت تشخیص بالا می باشد.

Smart SYBR Green qPCR mastermix حاوی یک بافر بهینه شده ، یک پلی مراز با کارایی بالا، نوکلئوتید ، رنگ سایبر گرین و یک پروتئین متصل شونده به پرایمر است.

تکنولوژی پرایمر بلاک استفاده شده در این محصول مانع از آغاز واکنش قبل از شروع واکنش می شود.

بنابراین واکنش با اختصاصیت و کارایی بالاتری انجام می شود.

Smart SYBR green به صورت 2X برای آماده سازی واکنش در غلظت 1X کافی است به این مستر میکس مطابق پروتکل آب، پرایمر و نمونه اضافه کنید.

کاربرد مستر میکس Smart SYBR Green qPCR :

• بررسی پروفایل بیانی
• مطالعات مبتنی بر SYBR Green qPCR

شرایط نگهداری مسترمیکس Smart SYBR Green qPCR :

• در دمای 20- نگهداری شود
• از انجماد و ذوب مکرر محصول خودداری کنید

ویژگی های مسترمیکس Smart SYBR Green qPCR :

• این محصول حاوی یک بافر بهینه شده ، یک پلی مراز با کارایی بالا، نوکلئوتید،رنگ سایبر گرین و یک پروتئین متصل شونده به پرایمر است.
• مسترمیکس 2X آماده استفاده می باشد
•  ریل تایم اسمارت گرین بر پایه رنگ سایبر گرین می باشد
•  باعث بلوکه شدن پرایمرها قبل از آغاز واکنش می شود
• سازگار با انواع دستگاههای Realtime PCR می باشد
• فاقد ROX است

یک نکته طلایی در مورد مسترمیکس سایبرگرین:

یک نکته مهم و کمتر گفته‌شده درباره مستر میکس SYBR Green در Real-Time PCR این است که شدت فلورسانس همیشه رابطه خطی با مقدار DNA هدف ندارد. مقدار DNA اولیه و طول محصول PCR می‌توانند باعث ایجاد منحنی‌های تقویت غیرطبیعی و خطای Ct شوند، حتی زمانی که واکنش از نظر ظاهری موفق به نظر می‌رسد.

علت اصلی، ماهیت غیر‌اختصاصی SYBR Green است؛ این رنگ به هر DNA دو‌رشته‌ای متصل می‌شود، نه فقط محصول هدف. بنابراین primer dimerها و محصولات غیراختصاصی نیز سیگنال ایجاد کرده و می‌توانند مقدار DNA هدف را بیش‌برآورد کنند.

نکته عملی برای کاهش خطا:
اجرای دقیق Melt Curve پس از PCR یک کنترل کیفی ضروری است. حتی وجود مقدار کمی dsDNA غیراختصاصی می‌تواند Ct را زودتر از مقدار واقعی نشان دهد. افزایش دما با شیب آهسته (حدود 0.1–0.2درجه سانتی گراد در ثانیه) پیک‌های کوچک مربوط به محصولات غیرهدف را آشکار می‌کند و اعتبار نتایج را بالا می‌برد.

ترفند کمتر گفته‌شده برای کاهش Primer Dimer:
کاهش غلظت پرایمر، همراه با بهینه‌سازی دمای Annealing و در صورت نیاز افزایش کنترل‌شده تعداد سیکل‌ها، تولید محصولات غیراختصاصی را کم کرده و سیگنال واقعی را شفاف‌تر می‌کند. ترکیب این روش با Melt Curve تشخیص سیگنال هدف از دایمرها را بسیار ساده‌تر می‌سازد.