کیت سنتز سی دی اِن آ | cDNA synthesis Kit

36،000،000 ﷼50 تستی

عملکرد عالی
قابلیت سنتز cDNA از RNA هایی با غلظت های پایین (1ng)
قابلیت استفاده از پرایمرهای Oligo dt و Random hexamer به صورت همزمان
سنتز به واسطه ترانس کریپتاز معکوس بسیار کارآمد MMLV
cDNA حاصل قابل استفاده در کلیه واکنش های پایین دستی
امکان سنتز cDNA از میکروRNA در صورت طراحی پرایمر اختصاصی توسط کاربر

برند	یکتا تجهیز آزما YTA

شناسه محصول: YT4500 دسته: RT-PCR, آنزیم ها و مستر میکس, محصولات

توضیحات

کیت سنتز cDNA synthesis Kit | cDNA

کیت سنتز cDNA شرکت یکتا تجهیز آزما یک کیت کامل است که شامل تمام اجزای مورد نیاز برای انجام یک سنتز cDNA کارآمد از الگوهای RNA می باشد.

این اجزا شامل یک آنزیم رونویسی معکوس (RT) ، dNTPs، بافر واکنش ، پرایمر و مهارکننده‌های RNase (RNase inhibitor) می باشد که RNase Inhibitor موجود در این کیت یک مهارکننده قوی RNaseها است.

علاوه بر پرایمر رندوم هگزامر موجود (Random hexamer) که به همه RNA های موجود در واکنش اجازه می دهد به عنوان الگو استفاده شوند ، یک پرایمر الیگو (Oligo dt) نیز برای سنتزcDNA از دم پلی A (Poly A tail) و به منظور افزایش انعطاف پذیری در کاربرد درکیت قرار داده شده است.

این کیت حاوی آنزیم رونویسی معکوس M-MLV Reverse Transcriptase (RT) با ویژگی عدم وجود RNaseH (RNase H- ) و نیز پایداری در برابر حرارت است.

وجود مواد مورد نیاز با کیفیت به همراه دستورالعمل بهینه ارائه شده ، منجر به افزایش بازده سنتز cDNA شده است.

این کیت به دلیل عملکرد قوی ، سهولت استفاده و سازگاری با واکنش های مختلف پایین دست وابسته به cDNA ، یک گزینه مناسب جهت cDNA synthesis می باشد.

کاربرد :

سنتزcDNA از mRNA
سنتزcDNA از میکروRNA در صورت طراحی پرایمر اختصاصی توسط کاربر

شرایط نگهداری:

در دمای 20- نگهداری شود

دستورالعمل ها

دانلود دستورالعمل کیت سنتز سی دی اِن آ | cDNA synthesis Kit

سوالات متداول

در صورت استفاده از هر دو پرایمر الیگو و رندوم هگزامر دمای واکنش را چه دمایی بگذاریم؟

با توجه به اینکه دمای مورد نیاز برای الیگو dt دمای 42 درجه سانتی گراد و دمای مورد نیاز برای رندوم هگزامر دمای 37درجه سانتی گراد می باشد بهتر است هنگام استفاده از هر دو پرایمر در یک واکنش، دمای 40 درجه سانتی گراد جهت انجام واکنش انتخاب شود.

مراحل سنتز cDNA شامل دو مرحله است که در هر مرحله یک تعدادی از مواد کیت با هم مخلوط می شوند، سوال اینجاست آیا این میکس های دو مرحله با هم مخلوط می شوند؟

پاسخ بله است، بر اساس پروتوکل کیت سنتز cDNA شرکت یکتا تجهیزآزما ابتدا در مرحله اول پرایمر، آب و نمونه را در یک ویال ریخته و به مدت 5دقیقه در دمای 70 درجه قرار می دهیم دراین فاصله زمانی یک میکروتیوب دیگر بردارید و بافر،dNTP ،RNasin و MMLV را بر اساس مقادیر گفته شده به هم اضافه میکنیم تا مخلوط دوم حاصل شود.پس از اتمام زمان 5دقیقه مخلوط اول را به مخلوط دوم اضافه کنید و در در انتها واکنش نهایی را در ترموسایکلر به مدت یک ساعت قرار دهید.

در کیت سنتز cDNA آیا می توان از دو پرایمر Oligodt و Random hexamer همزمان در واکنش سنتز استفاده کرد؟

پرایمر Random hexamer و پرایمر اولیگو dT دو نوع پرایمر هستند که در سنتز cDNA استفاده می شوند. Random hexamer از مخلوطی از اولیگونوکلئوتیدها تشکیل شده است که در طول تولید cDNA بع طور تصادفی به تمام مناطق RNA متصل می شود و یک مخزن cDNA حاوی طول های مختلف cDNA حاصل می شود. ، در حالی که پرایمر الیگو dT یک توالی تک رشته ای از 12 تا 18 نوکلئوتیدی است که dT به دنباله های polyA پیام رسان (mRNA) متصل و سنتز DNA مکمل (cDNA) را هدایت می کند. بنابراین، این تفاوت اصلی بین پرایمرهای تصادفی و الیگو dT است. علاوه بر این، پرایمرهای الیگو dT برای رونویسی معکوس تمام طول RNA با دم پلی (A) به کار بسته می شوند، در حالی که Random hexamer برای رونویسی معکوس اکثر گونه‌های RNA، از جمله RNA تخریب‌شده، RNA فاقد دم پلی (A) و RNA حاوی ساختارهای ثانویه کارایی دارد. بنابراین می توان از هر دو پرایمر به صورت همزمان در دمای 40 درجه سانتی گراد استفاده کرد.

آیا می توان برای سنتز میکروRNA از این کیت های سنتز cDNA استفاده کرد؟

بله، در صورتی که کاربر یک پرایمر اختصاصی برای سنتز cDNA ازمیکروRNA اختصاصی خود طراحی کند می تواند از سایر اجزای موجود در کیت جهت سنتز استفاده کند.

در صورت استفاده همزمان از دو پرایمر اولیگو و رندوم هگزامر در سنتز cDNA، دمای واکنش را روی چه درجه ای تنظیم کنیم؟

هنگام انجام سنتز cDNA با استفاده از کیت سنتز cDNA ؛ در صورت استفاده همزمان از دو پرایمر الیگو و رندام هگزامر دمای واکنش را روی درجه تنظیم کنید.

در صورت استفاده ازپرایمر لوپ ( (stem loop جهت micro RNA ، از چه دمایی برای واکنش استفاده کنیم ؟

تنطیم دمای پرایمر لوپ بستگی به خود پرایمر مورد استفاده دارد.

حداقل میزان Total RNA برای سنتز cDNA چقدر باید باشد؟

چنانچه کیفیت RNA خوب باشد از مقادیر پایین هم cDNA قابل سنتز هست،براساس پروتکل از 1 نانوگرم میشود سنتز انجام داد،اما به طور کلی اگر مثلا 50 نانوگرم از RNA داشته باشید میتوانید بطور مثال از 5 لاندا نمونه استفاده کنید.

ژورنالهای علمی و پژوهشی

Published online 2023 Apr 27 | Adv Biomed Res | Read article

Evaluation of Rap1GAP and EPAC1 Gene Expression in Endometriosis Disease

. All wome participating in this study were from the Iranian population living in Yazd. To maintain mRNA stability, the tissues were kept in RNA stabilizer solution (RNA later, Yekta Tajhiz Azma, Iran) at -80°C. The inclusion criteria....READ MORE

Published online 2023 Mar 21 | BMC Microbiol | Read article

Evaluation of the mTORC activity in the presence of Toxoplasma gondii and azathioprine in human monocyte cell line

Total RNA was extracted from THP-1 cell line in each tested well using total RNA extraction kit (Yekta Tajhiz Azma, Tehran, Iran) in accordance with the manufacturer’s protocol . Extracted RNA was purified by DNase (Thermo Fisher Scientific) treatment, and its concentration was calculated by ...READ MORE

Published online 2023 Mar| Iran J Basic Med Sci | Read article

Cannabidiol interacts with the FXR/Nrf2 pathway and changes the CB1/CB2 receptors ratio in gentamicin-induced kidney injury in rats

The RNA then was extracted using Trizol (Yekta Tajhiz Azma Co Iran) based on the manufacturer’s instructions. Then the cDNA synthesis was performed using a Reverse Transcriptase cDNA synthesis kit (Yekta Tajhiz Azma Co Iran), based on the protocol. Expression of the aforementioned genes was measured by Real-Time PCR ...READ MORE

Published online 2023 Mar 20| Springer Nature | Read article

Oral vaccination with novel Lactococcus lactis mucosal live vector-secreting Brucella lumazine synthase (BLS) protein induces humoral and cellular immune protection against Brucella abortus

instructions for RNA extraction and cDNA synthesis (Yekta Tajhiz, Iran). The GAPDH gene was utilized as an internal control during real-time PCR using the YTA SYBR Green master mix (Yekta Tajhiz, Iran). For real Time-PCR, a reaction volume ...READ MORE

Published online 2023| Iran J Basic Med Sci | Read article

Effects of exosomes of mesenchymal stem cells on cholesterol-induced hepatic fibrogenesis

Total RNA wasTotal RNA was extracted using an RNA Isolation Kit (Yekta Tajhiz Azma, Iran) according to the manufacturer’s instructions. The complementary DNA (cDNA) was synthesized by using a cDNA synthesis kit (Yekta Tajhiz Azma, Iran) READ MORE

Published online 2023 Aug 2| J Cell Mol Med | Read article

Characterisation of extracellular vesicles isolated from hydatid cyst fluid and evaluation of immunomodulatory effects on human monocytes

Total RNA was extracted after 3 and 24 h by total RNA extraction kit (Yekta Tajhiz Azma), according to the manufacturer's protocol. DNase (Thermo Fisher Scientific™) treatment was performed to remove the probable residual DNA and to improve the quality of the extracted RNA, according to the manufacturer's protocol. The RNA solution was finally collected and stored at −70 ° C until cDNA synthesis. Prior to cDNA synthesis, the concentration of purified RNA...READ MORE

Published online 2023 Jun 26| Scientific Reports | Read article

Integrated bioinformatics and wet-lab analysis revealed cell adhesion prominent genes CDC42, TAGLN and GSN as prognostic biomarkers in colonic-polyp lesions

Total RNAs were extracted from obtained samples (Yekta Tajhiz Azma kit, Cat No. YT9065, Teheran, Iran). The RNAs concentration was measured by Nanodrop (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE, USA) for acceptable quantification and qualification. RNAs were converted to cDNA by Retro transcriptase (RT) reaction (Yekta Tajhiz Azma kit, Cat No. YT9065, Teheran, Iran) after...READ MORE

Published online 2023 Jun 5| Vet Med Sci | Read article

Brucella abortus antigen omp25 vaccines: Development and targeting based on Lactococcus lactis

The PCR reaction was conducted to monitor omp25 using specific primers (Table 1). A 20‐mL PCR reaction contains 2 mL of ×10 PCR buffer (Yekta Tajhiz Azma, Iran), 2 mM MgCl2, 200 μM dNTPs (Yekta Tajhiz Azma, Iran), 10 pmol of each primer (CinnaGen, Iran), 100 ng of plasmid DNA and 1 unit of Taq DNA polymerase enzyme (Yekta Tajhiz Azma, Iran). The PCR ...READ MORE

Published online 2023 Feb 2| Elsevier - PMC COVID-19 Collection | Read article

Evaluation of Tcell exhaustion based on the expression of EOMES, Tbet and co-inhibitory receptors in severe and non-severe covid-19 patients

Initially, total RNA extraction of the blood sample collected from all participants was performed using the total RNA extraction kit (Yekta Tajhiz Azma kit, Teheran, Iran). A Nanodrop spectrophotometer (Plat reader epoch 2) was used to...READ MORE

Published online 2023 Jul 29| Bioimpacts | Read article

Comparison the therapeutic effects of bone marrow CD144+ endothelial cells and CD146+ mesenchymal stem cells in POF rats

Subsequently, defined concentrations of RNA were reverse-transcribed using a cDNA synthesis kit (Cat No: YT4500, Yekta Tajhiz Azma). Primers targeting target genes were designed using Primer-Blast online software...READ MORE

Published online 2023 Nov 8| Scientific Reports| Read article

Using machine learning approach for screening metastatic biomarkers in colorectal cancer and predictive modeling with experimental validation

We extracted total cellular RNA from both fresh frozen and paraffin-embedded tissues using the RNX kit (RNX, Cina Gene Company, Iran). Then Yekta Tajhiz cDNA Synthesis Kit (Yekta Tajhiz Azama, Iran) was used to convert the extracted RNA into cDNA...READ MORE

Published online 2023 Jan 11| Cell Prolif | Read article

The beneficial effects of chick embryo extract preconditioning on hair follicle stem cells: A promising strategy to generate Schwann cells

Total RNA was extracted from cells grown in 6‐well plates at ~90% confluency, using YTzol (Cat. No: YT9063; Yekta Tajhiz Azma, Iran) reagent by chloroform extraction and ethanol precipitation, according to the manufacturer's instructions, followed by...READ MORE

Published online 2023 Apr 3| BMC Complement Med Ther| Read article

Chamomile and Urtica dioica extracts improve immunological and histological alterations associated with polycystic ovarian syndrome in DHEA -induced mice

The adipose tissue surrounding the right ovary and uterus was separated and homogenized in the RNA Lysis buffer. Then, after extracting total RNA and synthesizing cDNA(Yekta Tajhiz, Iran), the primers of the target genes and a housekeeping gene (GAPDH) were designed using Allele ID 6 software (Premier Bio soft, USA) and aligned on BLAST website (Table 1). Real-time PCRs were...READ MORE

Published online 2023 Feb 14| Cell J| Read article

The Immunomodulatory Aspect of Quercetin Penta Acetate on Th17 Cells Proliferation and Gene Expression in Multiple Sclerosis

First, total RNA was isolated from the cultured PBMCs using an extraction kit (Yekta tajhiz azma Co. Iran) according to the manufacture instructions. The purity of isolated RNA was determined using a spectrophotometer. The first strand cDNA (Yekta tajhiz azma Co. Iran) ...READ MORE

Published online 2023 Jun 13.| Arch Med Sci| Read article

An in vitro investigation of the effects of urolithins A and B on low-density lipoprotein uptake and its regulatory genes

a cDNA synthesis kit (YT4500, Yekta Tajhiz Azma, Iran), DNase/RNase free water (CH8161, Sinaclon, Iran), and a QPCR master mix kit (BN-0011.17.4, Tehran, Iran), were used for tests...READ MORE

Published online 2023 Nov 8|Sci Rep| Read article

Nuclear overexpression of DNA damage-inducible transcript 4 (DDIT4) is associated with aggressive tumor behavior in patients with pancreatic tumors

extracted RNAs were measured in quantity and quality by Nanodrop (ThermoFisher Scientific, USA). Then RNA was reverse transcript into cDNA using the cDNA Synthesis Kit (Yekta Tajhiz Azma, YT4500, Iran).... READ MORE

Published online 2023 Sep 30|Prev Nutr Food Sci| Read article

Influence of 8 Weeks of Tabata High-Intensity Interval Training and Nanocurcumin Supplementation on Inflammation and Cardiorespiratory Health among Overweight Elderly Women

Total RNA, including lncRNA-MIAT and NLRP3 inflammasome coding, was extracted using a commercial kit (Yekta Tajhiz Co.), according to the manufacturer’s instructions... READ MORE

Published online 2023 Mar 1|Prev Nutr Food Sci| Read article

A1 adenosine receptor antagonist induces cell apoptosis in KYSE-30 and YM-1 esophageal cancer cell lines

Total RNA was extracted using the RNX plus reagent (Sinaclon, Iran) following the manufacturer’s instructions. The RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit (Yekta Tajiz, Iran) was used to... READ MORE

Published online 2023 Nov 21|Front Bioeng Biotechnol| Read article

Enhancing productivity of Chinese hamster ovary (CHO) cells: synergistic strategies combining low-temperature culture and mTORC1 signaling engineering

The total RNA was extracted from transfected cells using a Trizol reagent (Bio Basic, Canada) according to the manufacturer’s protocol. cDNA synthesis was carried out using the Yekta Tajhiz Azma cDNA Synthesis Kit (YT4500; Tehran, Iran). The real-time RT-qPCR analysis READ MORE

Published online 2023 |Iran J Basic Med Sci| Read article

Effect of a combined program of running exercise and environmental enrichment on memory function and neurogenesis markers in amyloid-beta-induced Alzheimer-like model

. First-strand cDNA was synthesized from 1000 ng of RNA using a cDNA Synthesis Kit (Yekta-Tajhiz; Cat: Yt4500), following the manufacturer’s instructions. qRT-PCR amplification was performed using the CFX 96 Real-Time System (Roche Applied Science, USA) and Syber Green dye... READ MORE

Published on 2023 |Int J Mol Cell Med| Read article

Amyloid Beta Alters the Expression of microRNAs Regulating HMGCR and ABCA1 Genes in Astrocytes of C57BL/6J Mice

For cDNA synthesis, the Yekta Tajhiz Azma cDNA kit was used with random hexamer and oligo-dT primers. In addition, to synthesize cDNA from miRNA, the BONmiR 1 st-strand cDNA synthesis kit (Bon Yakhteh Technology Research Center, Iran) was used... READ MORE

Published online 2023 Oct 21 |Int J Mol Cell Med| Read article

Metabolic and Transcriptomic Approaches of Chitosan and Water Stress on Polyphenolic and Terpenoid Components and Gene Expression in Salvia abrotanoides (Karl.) and S. yangii

To obtain the cDNA, the total RNA (1 μg) was reverse transcribed to cDNA using a cDNA synthesis kit (Yekta Tajhiz Azma, St. Rashid, Tehran, Iran), according to... READ MORE

Published online 2023 Aug 28 |Heliyon| Read article

Ameliorating inflammation in an in vitro model by screening the anti-inflammatory and immunomodulatory roles of putative probiotics in inflammatory bowel disease

An RNA extraction kit (Roche, Germany) and the cDNA synthesis kit (Yekta Tajhiz, Iran) were used according to the manufacturer's instructions. The online website Primer Bank... READ MORE

Published online 2023 Sep 21|BMC Complement Med Ther| Read article

Investigation of the anti-inflammatory effects of native potential probiotics as supplementary therapeutic agents in an in-vitro model of inflammation

. The quantity and quality of the purified RNA were determined by a NanoDrop1000 UV-Vis Spectrophotometer (measuring the absorbance at 260/280 nm). The cDNA template was synthesized with the cDNA synthesis kit (Yekta Tajhiz, Iran) according to the manufacturer’s instructions....READ MORE