بافر TBE با غلظت 10X

محلول  TBE buffe  |TBE

بافر TBE آماده برای الکتروفورز دقیق و پایدار DNA و RNA

محلول TBE با غلظت 10X یکی از پرکاربردترین بافرها در آزمایش‌های الکتروفورز ژل آگارز و پلی‌آکریل‌آمید است. این بافر با ترکیب دقیق Tris Base، اسید بوریک و EDTA، شرایطی ایده‌آل برای جداسازی قطعات DNA و RNA فراهم می‌کند و از تجزیه و تخریب آن‌ها جلوگیری می‌نماید.

بافرهای یکتا تجهیز آزما با مواد اولیه خالص (Molecular Biology Grade) تولید می‌شوند تا pH پایدار، باندهای واضح و نتایج تکرارپذیر تضمین شود.

 ویژگی‌ها و مزایای بافر TBE :

• حفظ pH ثابت در محدوده 8.0–8.3
• قدرت بافری بالا در طول فرآیند الکتروفورز
• جلوگیری از فعالیت آنزیم‌های نوکلئازی به کمک EDTA
• مناسب برای جداسازی دقیق قطعات کوچک DNA یا RNA
• قابلیت استفاده در غلظت‌های مختلف (1X، 5X، 10X)

نکته آزمایشگاهی بافر 10x TBE :

برخلاف تصور رایج، TBE برای الکتروفورز طولانی‌مدت DNA با اندازه کوچک–متوسط (مثلاً <1000 bp) پایدارتر از TAE است، اما اگر 10X TBE به‌درستی رقیق نشود یا بیش‌ازحد غلیظ استفاده شود، می‌تواند باعث گرم‌شدن ژل و «لبه‌دار شدن باندها» (band distortion) شود؛ حتی اگر ولتاژ استاندارد باشد.

 چرا این اتفاق می‌افتد؟
* یون‌های بورات در TBE هدایت الکتریکی بالاتری دارند.
* اگر به‌اشتباه به‌جای 1×، از 1.2× یا بیشتر استفاده شود.
* یا بافر قدیمی باشد و آب آن تبخیر شده باشد.

نتیجه:
افزایش جریان الکتریکی باعث گرم‌شدن ژل می‌شود و این افزایش دما در نهایت به کاهش تفکیک واقعی باندها منجر می‌گردد، به‌ویژه در قطعات DNA که اندازه آن‌ها به هم نزدیک است.

ترفند حرفه‌ای آزمایشگاهی برای استفاده بافر 10x TBE:

اگر ژل شما (high-resolution) است:
از 1X TBE تازه‌ساز استفاده کنید.
10X TBE را در بطری‌های کوچک نگه‌دار تا تبخیر آب رخ ندهد.
و برای ژل‌های ضخیم‌تر یا ران‌های طولانی، ولتاژ را 10–15٪ کمتر از حالت معمول تنظیم کنید.

نتیجه عملی:
در نتیجه، باندها شارپ‌تر دیده می‌شوند، پدیده‌ی اسمیر(smear) ایجاد نمی‌شود و هیچ‌گونه انحراف ناشی از گرما مشاهده نخواهد شد؛ حتی در مورد مارکرهایی که فاصله‌ی اندازه‌ای بسیار کمی با یکدیگر دارند.